Городская больница

Справочник заболеваний и лекарств

Определение группы крови сыворотками

Определение группы крови и резус-фактора

Определение группы крови и резус-фактора цоликлонами анти-А, анти-В и Анти-D по системе AB0 и системе Резус

Определение группы крови и резус-фактора цоликлонами анти-А, анти-В и Анти-D супер является наиболее современным и относительно простым методом. Для определения группы крови используются цоликлоны, т.е. моноклональные антитела.

Что требуется для определения группы крови и резус-фактора?

– цоликлон анти-А;

– цоликлон анти-В;

– цоликлон анти-D;

– раствор натрия хлорида 0,9 %; специальный планшет; стерильные палочки.

Алгоритм и порядок определения группы крови

Нанести цоликлоны анти-А, анти-В на специальный планшет по одной большой капле (0,1 мл), под соответствующими надписями.

Рядом с ними капнуть исследуемую кровь (0,01–0,03 мл) по одной маленькой капле. Перемешать их и наблюдать за наступлением или отсутствием реакции агглютинации в течение 3 мин. При сомнительном результате добавить 1 каплю 0,9% физиологического раствора.

Расшифровка результатов определения группы крови

  • если реакция агглютинации наступила с анти-А цоликлоном, то исследуемая кровь относится к группе А (II);
  • если реакция агглютинации наступила с анти-B цоликлоном, то исследуемая кровь относится к группе B (III);
  • если реакция агглютинации не наступила с анти-А и с анти-B цоликлонами, то исследуемая кровь относится к группе 0 (I);
  • если реакция агглютинации наступила с анти-А и с анти-B цоликлонами, то исследуемая кровь относится к группе AB (IV), как показано на рисунке.

AB (IV)

Определение резус-фактора цоликлоном Анти-D

На планшете смешивают большую каплю (0,1 мл) анти-D цоликлона и маленькую каплю (0,01 мл) исследуемой крови пациента. За наступлением реакции агглютинации или её отсутствием наблюдают в течение 3 мин.

  • если реакция агглютинации наступила с цоликлоном анти-D , то исследуемая кровь относится к резус-положительной (Rh+)
  • если реакция агглютинации не наступила с цоликлоном анти-D, то исследуемая кровь относится к резус-отрицательной (Rh—)

Показания: необходимость переливания крови и ее компонентов.

Необходимые условия: помещение с хорошим освещением и температурой от 15одо 25оС.

Оснащение: два комплекта стандартных гемагглютинирующих сывороток I (О), II (А), III (В) групп двух различных серий и одна ампула сыворотки IV (АВ) (в каждую ампулу с сывороткой опускают сухую чистую пипетку), флакон с изотоническим раствором хлорида натрия с пипеткой, чисто вымытая сухая специальная маркированная или фаянсовая тарелка, предметные стекла, стеклянные палочки, стерильные копьевидные иглы для прокола мякоти пальца, стерильные марлевые шарики, спирт, песочные часы на 5 минут.

Этапы Обоснование
1.Перед началом работы моют руки, одевают стерильные перчатки. С целью инфекционной безопасности медперсонала при работе с кровью.
2.Проверяют чтобы каждая ампула стандартной сыворотки имела паспорт – этикетку с указанием группы крови, номера серии, титра, срока годности, места изготовления. Ампулой без этикетки пользоваться запрещается. Сыворотка должна быть светлой и прозрачной, ампула сохранной, титр не менее 1:32. Сыворотки располагают в специальных штативах в 2 ряда. Стандартные сыворотки: I (О) – бесцветная – на этикетке полос нет; II (А) – голубая – на этикетке 2 полосы синего цвета; III (В) – красная – на этикетке 3 полосы красного цвета; IV (АВ) – желтая – на этикетке 4 полосы желтого цвета. Наличие хлопьев, осадков являются признаками непригодности сыворотки. Сыворотки с истекшими сроками хранения к использованию непригодны.
3.На стандартную или поделенную цветным карандашом на 4 квадрата тарелку наносят по одной капле сыворотки двух серий I (О), II (А), III (В) групп. На тарелке поделенной цветным карандашом необходимо в каждом квадрате указать группу крови. На стандартную или поделенную цветным карандашом на 4 квадрата тарелку наносят по одной капле сыворотки двух серий I (О), II (А), III (В), IV (АВ) для исключения ошибки при чтении результата.
4.Каплю крови из пробирки или пальца наносят пипеткой или стеклянной палочкой или около каждой капли сыворотки (крови должно быть в 10 раз меньше чем сыворотки) и смешивают разными стеклянными палочками или разными уголками предметного стекла. Для получения крови из пальца подушечку пальца обрабатывают спиртом и делают прокол кожи иглой – копьем. Первую каплю крови снимают марлевым шариком, последующие разными уголками предметного стекла для исключения ложной реакции агглютинации.
5.После смешивания тарелку осторожно покачивают в руках. Для более быстрой и четкой агглютинации эритроцитов.
6.По мере наступления агглютинации, но не ранее чем через 3 минуты в каждую каплю сыворотки с эритроцитами, где наступила агглютинация добавляют по 1 капле 0,9% натрия хлорида, покачивая тарелку смешивают и продолжают наблюдение до истечения 5 минут. При положительной реакции изогемагглютинации хлопья и зернышки из клеившихся эритроцитов не расходятся при добавлении изотонического раствора хлорида натрия и перемешивании. При отрицательной реакции капли сыворотки на тарелке прозрачные, равномерно розового цвета, не содержат хлопьев и зерен.
7.Через 5 минут читают реакцию в проходящем свете. Если агглютинация нечеткая, к смеси сыворотки и крови дополнительно добавляют по одной капле 0,9% раствора натрия хлорида после чего дают заключение о групповой принадлежности; возможны следующие 4 комбинации: а) все три сыворотки в обеих сериях не дают агглютинации. Исследуемая кровь I (О) группы; б)реакция изогемагглютинации отрицательная с сывороткой I (О) и III (В) групп исследуемая кровь II (А) групп; в)реакция изогемагглютинации отрицательная с сывороткой III (В) группы в обеих сериях и положительная с сыворотками I (О) и II (А) групп. Исследуемая кровь III (В) группы; г) сыворотки I (О), II (А), III (В) групп дают положительную реакцию в обеих сериях. Кровь принадлежит к IV (АВ) группе. Но прежде чем дать такое заключение, необходимо провести реакцию изогемагглютинации со стандартной сывороткой IV (АВ) группы по той же методике. Отрицательная реакция изогемагглютинации позволяет окончательно отнести исследуемую кровь к IV (АВ) группе а) отсутствие агглютинации во всех каплях указывает на то, что в исследуемой крови нет агглютиногена, т.е. кровь относится к группе I (О); б) наступление агглютинации в каплях с сыворотками О (I) и В (III) указывает на то, что в крови имеется агглютиноген А, т.е. кровь относится к группе II (А); в) наличие агглютинации в каплях с сыворотками группы I (О) и II (А) указывает на то, что в исследуемой крови имеется агглютиноген В, т.е. кровь относится к группе III (В); г) агглютинация во всех каплях указывает на наличие в исследуемой крови агглютиногенов А и В, т.е. кровь относится к группе IV (АВ) однако учитывая, что агглютинация со всеми сыворотками возможна за счет неспецифической реакции, необходимо на тарелку нанести каплю сыворотки IV (АВ) Группы и добавить к ней 1 каплю исследуемой крови в соотношении 10:1 сыворотку и кровь переливают и наблюдают результат в течение 5 минут. Если агглютинация не наступила, то исследуемую кровь относят к IV (АВ) группе.
8.Выявление других комбинаций говорит о неправильном определении групповой принадлежности крови больного. При слабой агглютинации и во всех сомнительных случаях кровь заново проверяют со стандартными сыворотками других серий.
9.Ошибки при определении групповой принадлежности крови и не выявленной агглютинации могут быть обусловлены: 1) слабой активностью стандартной сыворотки или низкой агглютинабельностью эритроцитов; 2) избыточным количеством исследуемой крови, добавляемой к стандартной сыворотке; 3) замедленной реакцией агглютинации при высокой температуре окружающей среды. Для избежания ошибок: 1) использовать активные с достаточно высоким титром сыворотки 1:32; 2) соотношение объема исследуемой крови и стандартной сыворотки 1:10; 3) исследование проводишь при температуре не выше 25оС; 4) оценивать результаты не ранее чем через 5 минут после исследования; 5) строго и тщательно соблюдать все правила исследования.

№ 11.

Задача № 1.

Ребенок 6-ти лет, находится на стационарном лечении с диагнозом «Аскаридоз». При сестринском обследовании медицинская сестра получила следующие данные: жалобы на тошноту, рвоту, боли в области пупка, потерю аппетита, похудание, быструю утомляемость, беспокойный сон, ночные страхи. Болен в течении нескольких недель.

Объективно:Кожные покровы бледные, подкожно-жировой слой недостаточно развит, боль при пальпации в области пупка. Стул со слов мальчика без патологии.

Назначения:

1. Кал на я/глист

2. Анализ крови общий

3. Декарис 5 мг/кг, однократно, через 7 дней повторить

4. Диета №5

Задания:

1. Выявите, удовлетворение, каких потребностей нарушено и проблемы пациента.

2. Обоснуйте проблемы пациента.

3. Определите цели и составьте план сестринского вмешательства с мотивацией

4. Соскоб на энтеробиоз

Задача № 2.

Пациент предъявляет жалобы на повышение температуры до 39°С, слабость, разбитость во всем теле, мышечные боли, боли в суставах, боли при движении глазных яблок, сухой болезненный кашель, герпетические высыпания на губах.

Объективно: кожные покровы повышенной влажности, на верхней губе герпетические высыпания, гиперемия конъюнктив, слезотечение, гиперемия в зеве, жесткое дыхание в легких. ЧСС-86 в 1 минуту, АД 110/70 мм рт. ст. Печень, селезенка не увеличены. Физиологические отправления без особенностей.

В анализе крови: Л- 4,5*10 9/л, п/я- 3; с/я- 40; л-52; м-5; СОЭ-18мм/час.

Задание

1. Выявите проблемы пациента, удовлетворение которых нарушено; сформулируйте и обоснуйте проблемы пациента.

2. Определите цели и составьте план сестринских вмешательств с мотивацией.

3. Расскажите правила постановки инсулина.

Показания: необходимость переливания крови, подготовка к оперативному вмешательств.

Приготовить: стандартную тарелочку с углублениями; набор стеклянных палочек; изотонический раствор хлорида натрия; набор гемагглютинирующих сывороток 1, 2, 3, 4 групп двух серий; пипетки; исследуемую взятую из вены или пальца кровь; часы; лотки; перчатки; емкости для отработанного материала; контейнеры с дезинфицирующими растворами.

Подготовка к манипуляции:

  1. Медицинская сестра полностью подготовлена к выполнению манипуляции: одета в костюм (халат), маску, перчатки, колпак, сменную обувь.
  2. Проверить качество стандартных гемагглютинирующих сывороток по: цветовой маркировке, внешнему виду (светлая, прозрачная); сохранность упаковки, наличию правильно оформленной этикетки.
  3. Подготовить все необходимое для выполнения манипуляции.

Выполнение манипуляции:

— на белую тарелочку, согласно обозначению, последовательно нанести по одной капле сыворотки 1, 2, 3 групп двух серий. Каждую пипетку немедленно опускать в ту же ампулу (флакон) из которых они были взяты;

— с помощью стеклянной палочки нанести рядом с углублениями (6 углублений) по капле исследуемой крови. Капля крови должна быть в 10 раз меньше капли сыворотки;

— отметить время и чистой, сухой стеклянной палочкой перемешать кровь с сывороткой 1 гр., затем другой палочкой 2 гр. и т.д. во всех углублениях;

— по мере наступления агглютинации, но не ранее 3 минуты, в те капли, в которых наступила реакция агглютинации добавить по одной капле изотонического раствора хлорида натрия для исключения ложной агглютинации и продолжать наблюдение в течение 5 минут.

Оценка результатов:

а) при положительной реакции в смеси появляются видимые глазом мельчайшие зернышки, состоящие из склеившихся эритроцитов. Мелкие зерна сливаются в крупные зерна, а иногда в хлопья, сыворотка при этом – обесцвечивается;

б) при отрицательной реакции жидкость остается равномерно окрашенной в розовый цвет;

в) возможны 4 комбинации положительной и отрицательной реакции:

1. Если агглютинации нет ни в одной из ячеек, то кровь I (0) группы.

2. Если агглютинация в первой и третей ячейках, то кровь II (А) группы.

3. Если агглютинация в первой и второй группах, то кровь III (В) группы.

4. Если агглютинация в первой, второй, третей ячейках, то кровь IV (АВ) группы.

Для исключения ошибки проверяют кровь с сывороткой 4 группы, где агглютинации не должно быть.

Окончание манипуляции:

  1. Снять перчатки, поместить их в дезинфицирующий раствор.
  2. Вымыть руки, осушить полотенцем.

Примечание: определение группы крови производится в помещении с хорошим освещением при температуре 15 – 25 0С.

Группа крови (АВ0)

Определяет принадлежность к определенной группе крови по системе АВО.

Функции. Группы крови — это генетически наследуемые признаки, не изменяющиеся в течение жизни при естественных условиях. Группа крови представляет собой определенное сочетание поверхностных антигенов эритроцитов (агглютиногенов) системы АВО.Определение групповой принадлежности широко используется в клинической практике при переливании крови и ее компонентов, в гинекологии и акушерстве при планировании и ведении беременности. Система групп крови AB0 является основной системой, определяющей совместимость и несовместимость переливаемой крови, т.к. составляющие ее антигены наиболее иммуногенны. Особенностью системы АВ0 является то, что в плазме у неиммунных людей имеются естественные антитела к отсутствующему на эритроцитах антигену. Систему группы крови АВ0 составляют два групповых эритроцитарных агглютиногена (А и В) и два соответствующих антитела — агглютинины плазмы альфа(анти-А) и бета(анти-В). Различные сочетания антигенов и антител образуют 4 группы крови:

  • Группа 0(I) — на эритроцитах отсутствуют групповые агглютиногены , в плазме присутствуют агглютинины альфа и бета.
  • Группа А(II) — эритроциты содержат только агглютиноген А, в плазме присутствует агглютинин бета;
  • Группа В(III) — эритроциты содержат только агглютиноген В, в плазме содержится агглютинин альфа;
  • Группа АВ(IV) — на эритроцитах присутствуют антигены А и В, плазма агглютининов не содержит.

Определение групп крови проводят путем идентификации специфических антигенов и антител (двойной метод, или перекрестная реакция).

Несовместимость крови наблюдается, если эритроциты одной крови несут агглютиногены (А или В), а в плазме другой крови содержатся соответствующие агглютинины (альфа- или бета), — при этом происходит реакция агглютинации.

Переливать эритроциты, плазму и особенно цельную кровь от донора к реципиенту нужно строго соблюдая групповую совместимость. Чтобы избежать несовместимости крови донора и реципиента, необходимо лабораторными методами точно определить их группы крови. Лучше всего переливать кровь, эритроциты и плазму той же группы, которая определена у реципиента. В экстренных случаях эритроциты группы 0 (но не цельную кровь!) можно переливать реципиентам с другими группами крови; эритроциты группы А можно переливать реципиентам с группой крови А и АВ, а эритроциты от донора группы В — реципиентам группы В и АВ.

Карты совместимости групп крови (агглютинация обозначена знаком +):

Кровь донора

Кровь реципиента

0 (I)

A (II)

B (III)

AB (IV)

0(I)

+

+

+

A(II)

+

+

+

B(III)

+

+

+

AB (IV)

+

+

+

Эритроциты донора

Кровь реципиента

0 (I)

A (II)

B (III)

AB (IV)

0(I)

A(II)

+

+

B(III)

+

+

AB (IV)

+

+

+

Групповые агглютиногены находятся в строме и оболочке эритроцитов. Антигены системы АВО выявляются не только на эритроцитах, но и на клетках других тканей или даже могут быть растворенными в слюне и других жидкостях организма. Развиваются они на ранних стадиях внутриутробного развития, и у новорожденного уже находятся в существенном количестве. Кровь новорожденных детей имеет возрастные особенности — в плазме могут еще не присутствовать характерные групповые агглютинины, которые начинают вырабатываться позже (постоянно обнаруживаются после 10 месяцев) и определение группы крови у новорожденных в этом случае проводится только по наличию антигенов системы АВО.

Помимо ситуаций, связанных с необходимостью переливания крови, определение группы крови, резус-фактора, а также наличия аллоиммунных антиэритроцитарных антител должно проводиться при планировании или во время беременности для выявления вероятности иммунологического конфликта матери и ребенка, который может приводить к гемолитической болезни новорожденных.

Гемолитическая болезнь новорожденных

Гемолитическая желтуха новорожденных, обусловленная иммунологическим конфликтом между матерью и плодом из-за несовместимости по эритроцитарным антигенам. Болезнь обусловлена несовместимостью плода и матери по D-резус- или АВО-антигенам, реже имеет место несовместимость по другим резус-(С, Е, с, d, e) или М-, М-, Kell-, Duffy-, Kidd-антигенам. Любой из указанных антигенов (чаще D-резус-антиген), проникая в кровь резус-отрицательной матери, вызывает образование в ее организме специфических антител. Последние через плаценту поступают в кровь плода, где разрушают соответствующие антигенсодержащие эритроциты.. Предрасполагают к развитию гемолитической болезни новорожденных нарушение проницаемости плаценты, повторные беременности и переливания крови женщине без учета резус-фактора и др. При раннем проявлении заболевания иммунологический конфликт может быть причиной преждевременных родов или выкидышей.

Существуют разновидности (слабые варианты) антигена А (в большей степени) и реже антигена В. Что касается антигена А, имеются варианты: «сильный» А1 (более 80%), слабый А2 (менее 20%), и еще более слабые (А3, А4, Ах — редко). Это теоретическое понятие имеет значение для переливания крови и может вызвать несчастные случаи при отнесении донора А2 (II) к группе 0 (I) или донора А2В (IV) — к группе В (III), поскольку слабая форма антигена А иногда обуславливает ошибки при определении группы крови системы АВO. Правильное определение слабых вариантов антигена А может требовать повторных исследований со специфическими реагентами.

Снижение или полное отсутствие естественных агглютининов альфа и бета иногда отмечается при иммунодефицитных состояниях :

  • новообразования и болезни крови — болезнь Ходжкина, множественная миелома, хроническая лимфатическая лейкемия;
  • врожденные гипо- и агаммаглобулинемия;
  • у детей раннего возраста и у пожилых;
  • иммуносупрессивная терапия;
  • тяжелые инфекции.

Трудности при определении группы крови вследствие подавления реакции гемагглютинации возникают также после введения плазмозаменителей, переливания крови, трансплатации, септицемии и пр.

Наследование групп крови

В основе закономерностей наследования групп крови лежат следующие понятия. В локусе гена АВО возможны три варианта (аллеля) — 0, A и B, которые экспрессируются по аутосомно-кодоминантному типу. Это означает, что у лиц, унаследовавших гены А и В, экспрессируются продукты обоих этих генов, что приводит к образованию фенотипа АВ (IV). Фенотип А (II) может быть у человека, унаследовавшего от родителей или два гена А, или гены А и 0. Соответственно фенотип В (III) — при наследовании или двух генов В, или В и 0. Фенотип 0 (I) проявляется при наследовании двух генов 0. Таким образом, если оба родителя имеют II группу крови (генотипы AА или А0), кто-то из их детей может иметь первую группу (генотип 00). Если у одного из родителей группа крови A(II) с возможным генотипом АА и А0, а у другого B(III) с возможным генотипом BB или В0 — дети могут иметь группы крови 0(I), А(II), B(III) или АВ (!V).

Показания к назначению анализа:

  • Определение трансфузионной совместимости;
  • Гемолитическая болезнь новорожденных (выявление несовместимости крови матери и плода по системе АВ0);
  • Предоперационная подготовка;
  • Беременность (подготовка и наблюдение в динамике беременных с отрицательным резус-фактором)

Подготовка к исследованию: не требуется
Материал для исследования: цельная кровь (с ЭДТА)
Метод определения: Фильтрация проб крови сквозь гель, импрегнированный моноклональными реагентами — агглютинация + гель-фильтрация (карточки, перекрестный метод).
При необходимости (обнаружение А2-подтипа) проводится дополнительное тестирование с использованием специфических реактивов.
Сроки исполнения: 1 день
Результат исследования:

  • 0 (I) — первая группа,
  • A (II) — вторая группа,
  • B (III) — третья группа,
  • AB (IV) — четвертая группа крови.

При выявлении подтипов (слабых вариантов) групповых антигенов результат выдается с соответствующим комментарием, например, «выявлен ослабленный вариант А2, необходим индивидуальный подбор крови».

Резус-фактор Rh

Основной поверхностный эритроцитарный антиген системы резус, по которому оценивают резус-принадлежность человека.

Функции. Антиген Rh — один из эритроцитарных антигенов системы резус, располагается на поверхности эритроцитов. В системе резус различают 5 основных антигенов. Основным (наиболее иммуногенным) является антиген Rh (D), который обычно подразумевают под названием резус-фактор. Эритроциты примерно 85% людей несут этот белок, поэтому их относят к резус-положительным (позитивным). У 15 % людей его нет, они резус-отрицательны (негативны). Наличие резус-фактора не зависит от групповой принадлежности по системе АВ0, не изменяется в течение жизни, не зависит от внешних причин. Он появляется на ранних стадиях внутриутробного развития, и у новорожденного уже обнаруживается в существенном количестве. Определение резус принадлежности крови применяется в общей клинической практике при переливании крови и ее компонентов, а также в гинекологии и акушерстве при планировании и ведении беременности.

Несовместимость крови по резус-фактору (резус-конфликт) при переливании крови наблюдается, если эритроциты донора несут Rh -агглютиноген, а реципиент является резус-отрицательным. В этом случае у резус-отрицательного реципиента начинают вырабатываться антитела, направленные против резус-антигена , приводящие к разрушению эритроцитов. Переливать эритроциты, плазму и особенно цельную кровь от донора к реципиенту нужно строго соблюдая совместимость не только по группе крови, но и по резус-фактору. Присутствие и титр уже имеющихся в крови антител к резус-фактору и других аллоиммунных антител можно определить, указав тест «anti-Rh (титр)».

Определение группы крови, резус-фактора, а также наличия аллоиммунных антиэритроцитарных антител должно проводиться при планировании или во время беременности для выявления вероятности иммунологического конфликта матери и ребенка, который может приводить к гемолитической болезни новорожденных. Возникновение резус-конфликта и развитие гемолитической болезни новорожденных возможно в том случае, если беременная резус-отрицательна, а плод- резус-положителен. В случае, если у матери Rh +, а плод — резус — отрицателен, опасности гемолитической болезни для плода нет.

Гемолитическая болезнь плода и новорожденных — гемолитическая желтуха новорожденных, обусловленная иммунологическим конфликтом между матерью и плодом из-за несовместимости по эритроцитарным антигенам. Болезнь может быть обусловлена несовместимостью плода и матери по D-резус- или АВО-антигенам, реже имеет место несовместимость по другим резус-(С, Е, с, d, e) или М-, N-, Kell-, Duffy-, Kidd-антигенам (по статистике 98% случаев гемолитической болезни новорожденных связаны с D — резус-антигеном). Любой из указанных антигенов, проникая в кровь резус-отрицательной матери, вызывает образование в ее организме специфических антител. Последние через плаценту поступают в кровь плода, где разрушают соответствующие антигенсодержащие эритроциты. Предрасполагают к развитию гемолитической болезни новорожденных нарушение проницаемости плаценты, повторные беременности и переливания крови женщине без учета резус-фактора и др. При раннем проявлении заболевания иммунологический конфликт может быть причиной преждевременных родов или повторных выкидышей.

В настоящее время существует возможность медицинской профилактики развития резус-конфликта и гемолитической болезни новорожденных. Все резус-отрицательные женщины в период беременности должны находиться под наблюдением врача. Необходимо также контролировать в динамике уровень резус-антител.

Есть небольшая категория резус-положительных лиц, способных образовывать анти-резус антитела. Это лица, эритроциты которых характеризуются значительно сниженной экспрессией нормального антигена Rh на мембране («слабый» D, Dweak) или экспрессией измененного антигена Rh (частичный D, Dpartial). Эти слабые варианты антигена D в лабораторной практике объединяют в группу Du , частота которой составляет около 1%.

Реципиенты, содержание антиген Du, должны быть отнесены к резус-отрицательным и им должна быть перелита только резус-отрицательная кровь, так как нормальный антиген D может вызвать у таких лиц иммунный ответ. Доноры с антигеном Du квалифицируются как резус-положительные доноры, так как переливание их крови может вызвать иммунный ответ у резус-отрицательных реципиентов, а в случае предшествующей сенсибилизации к антигену D — и тяжелые трансфузионные реакции.

Наследование резус-фактора крови.

В основе закономерностей наследования лежат следующие понятия. Ген, кодирующий резус-фактор D (Rh), является доминантным, аллельный ему ген d — рецессивным (резус-положительные люди могут иметь генотип DD или Dd, резус-отрицательные — только генотип dd). Человек получает от каждого из родителей по 1 гену — D или d, и у него возможны, таким образом, 3 варианта генотипа — DD, Dd или dd. В первых двух случаях (DD и Dd) анализ крови на резус фактор даст положительный результат. Только при генотипе dd человек будет иметь резус-отрицательную кровь.

Рассмотрим некоторые варианты сочетания генов, определяющих наличие резус фактора, у родителей и ребенка

  • 1) Отец резус — позитивный (гомозигота, генотип DD), у матери резус — отрицательный (генотип dd). В этом случае все дети будут резус — положительными (вероятность 100%).
  • 2) Отец резус — позитивный (гетерозигота, генотип Dd), мать — резус- отрицательная (генотип dd). В этом случае вероятность рождения ребенка с отрицательным или положительным резусом одинакова и равна 50 %.
  • 3) Отец и мать гетерозиготы по данному гену (Dd), оба резус — позитивны. В этом случае возможно (с вероятностью около 25%) рождение ребенка с отрицательным резусом.
  • Определение трансфузионной совместимости;
  • Гемолитическая болезнь новорожденных (выявление несовместимости крови матери и плода по резус-фактору);
  • Предоперационная подготовка;
  • Беременность (профилактика резус-конфликта).

Подготовка к исследованию: не требуется.
Материал для исследования: цельная кровь (с ЭДТА)
Метод определения: Фильтрация проб крови сквозь гель, импрегнированный моноклональными реагентами — агглютинация + гель-фильтрация (карточки, перекрестный метод).
Сроки исполнения: 1 день
Интерпретация результатов:
Результат выдается в форме:
Rh + положительная Rh — отрицательная
При выявлении слабых подтипов антигена D (Du) выдается комментарий : «выявлен слабый резус-антиген (Du), рекомендуется при необходимости переливать резус-отрицательную кровь».

Анти — Rh (аллоиммунные антитела к резус-фактору и другим эритроцитарным антигенам)

Антитела к клинически наиболее важным эритроцитарным антигенам, в первую очередь резус-фактору, свидетельствующие о сенсибилизации организма к этим антигенам.

Функции. Резус-антитела относятся к так называемым аллоиммунным антителам. Аллоиммунные антиэритроцитарные антитела (к резус-фактору или другим эритроцитарным антигенам) появляются в крови при особых условиях — после переливания иммунологически несовместимой донорской крови или при беременности, когда эритроциты плода, несущие иммунологически чужеродные для матери отцовские антигены, проникают через плаценту в кровь женщины. У неиммунных резусотрицательных людей антител к резус-фактору нет. В системе резус различают 5 основных антигенов, основным (наиболее иммуногенным) является антиген D (Rh), который обычно подразумевают под названием резус-фактор. Помимо антигенов системы резус есть еще ряд клинически важных эритроцитарных антигенов, к которым может возникать сенсибилизация, вызывающая осложнения при переливании крови. Метод скринингового исследования крови на присутствие аллоиммунных антиэритроцитарных антител, использующийся в ИНВИТРО, позволяет, помимо антител к резус-фактору RH1(D), выявить в исследуемой сыворотке аллоиммунные антитела и к другим эритроцитарным антигенам.

Ген, кодирующий резус-фактор D (Rh), является доминантным, аллельный ему ген d — рецессивным (резус-положительные люди могут иметь генотип DD или Dd, резус-отрицательные — только генотип dd). Во время беременности резус-отрицательной женщины резус-положительным плодом возможно развитие иммунологического конфликта матери и плода по резус-фактору. Резус-конфликт может привести к выкидышу или развитию гемолитической болезни плода и новорожденных. Поэтому определение группы крови, резус-фактора, а также наличия аллоиммунных антиэритроцитарных антител должно проводиться при планировании или во время беременности для выявления вероятности иммунологического конфликта матери и ребенка. Возникновение резус-конфликта и развитие гемолитической болезни новорожденных возможно в том случае, если беременная резус-отрицательна, а плод — резус-положителен. В случае, если у матери резус-антиген положительный, а у плода отрицательный, конфликт по резус-фактору не развивается. Частота развития резус-несовместимости составляет 1 случай на 200-250 родов.

Гемолитическая болезнь плода и новорожденных — гемолитическая желтуха новорожденных, обусловленная иммунологическим конфликтом между матерью и плодом из-за несовместимости по эритроцитарным антигенам. Болезнь обусловлена несовместимостью плода и матери по D-резус- или АВО- (групповым) антигенам, реже имеет место несовместимость по другим резус-(С, Е, с, d, e) или М-, М-, Kell-, Duffy-, Kidd-антигенам. Любой из указанных антигенов (чаще D-резус-антиген), проникая в кровь резус-отрицательной матери, вызывает образование в ее организме специфических антител. Проникновению антигенов в материнский кровоток способствуют инфекционные факторы, повышающие проницаемость плаценты, мелкие травмы, кровоизлияния и другие повреждения плаценты. Последние через плаценту поступают в кровь плода, где разрушают соответствующие антигенсодержащие эритроциты. Предрасполагают к развитию гемолитической болезни новорожденных нарушение проницаемости плаценты, повторные беременности и переливания крови женщине без учета резус-фактора и др. При раннем проявлении заболевания иммунологический конфликт может быть причиной преждевременных родов или выкидышей.

Во время первой беременности резус-положительным плодом у беременной с Rh «-» риск развития резус-конфликта составляет 10-15 %. Происходит первая встреча организма матери с чужеродным антигеном, накопление антител происходит постепенно, начиная, приблизительно с 7-8 недели беременности. Риск несовместимости возрастает с каждой последующей беременностью резус — положительным плодом, независимо от того, чем она закончилась (искусственным абортом, выкидышем или родами, операцией при внематочной беременности), при кровотечениях во время первой беременности, при ручном отделении плаценты, а также если роды проводятся путем кесарева сечения или сопровождаются значительной кровопотерей. при переливании резус-положительной крови (в том, случае, если они проводились даже в детском возрасте). Если последующая беременность развивается с резус-отрицательным плодом, несовместимость не развивается.

Всех беременных женщин с Rh «-» ставят на специальный учет в женской консультации и проводят динамический контроль над уровнем резус-антител. В первый раз анализ на антитела надо сдать с 8-й до 20-й недели беременности, и затем периодически проверять титр антител: 1 раз в месяц до 30-й недели беременности, дважды в месяц до 36-й недели и 1 раз в неделю до 36-й недели. Прерывание беременности на сроке менее 6-7 недель может не привести к формированию у матери Rh-антител. В этом случае при последующей беременности, если у плода будет положительный резус-фактор, вероятность развития иммунологической несовместимости вновь будет равна 10-15 %.

Проведение тестирования на аллоиммунные антиэритроцитарные антитела важно также при общей предоперационной подготовке, особенно для людей, которым ранее уже проводилось переливание крови.

  • Беременность (профилактика резус-конфликта);
  • Наблюдение за беременными с отрицательным резус-фактором;
  • Невынашивание беременности;
  • Гемолитическая болезнь новорожденных;
  • Подготовка к гемотрансфузии.

Подготовка к исследованию: не требуется.
Материал для исследования: цельная кровь (с ЭДТА)
Метод определения: метод агглютинации + гель-фильтрации (карточки). Инкубация стандартных типированных эритроцитов с исследуемой сывороткой и фильтрация путем центрифугирования смеси через гель, импрегнированный полиспецифическим антиглобилиновым реагентом. Агглютинированные эритроциты выявляются на поверхности геля или в его толще.
В методе используются суспензии эритроцитов доноров группы 0(1), типирован-ные по антигенам эритроцитов RH1(D), RH2(C), RH8(Cw), RH3(E), RH4(c), RH5(e), KEL1(K), KEL2(k), FY1(Fy a) FY2(Fy b), JK (Jk a), JK2(Jk b), LU1 (Lu a), LU2 (LU b), LE1 (LE a), LE2 (LE b), MNS1(M), MNS2 (N), MNS3 (S), MNS4(s), P1 (P).
Сроки исполнения: 1 день
При обнаружении аллоиммунных антиэритроцитарных антител проводится их полуколичественное определение.
Результат выдается в титрах (максимальное разведение сыворотки, при котором еще обнаруживается положительный результат).
Единицы измерения и коэффициенты пересчета: Ед/мл
Референсные значения: отрицательно.
Положительный результат: Сенсибилизация к резус-антигену или другим эритроцитарным антигенам.

Для определения групп крови применяются стандартные эритроциты с известными агглютиногенами А и В и плазма крови реципиента, в которой определяется наличие агглютининов»a» и «b».

Техника получения стандартных эритроцитов: У доноров забирается кровь трех групп — 0I, АII, ВIII. Забранную кровь отмывают. Вначале кровь центрифугируют для разделения на фракции — плазму и эритроциты. Плазму удаляют, а к эритроцитам добавляют физиологический раствор поваренной соли и смешивают. Затем кровь вновь центрифугируют и удаляют жидкую часть. К оставшимся эритроцитам повторно добавляют физиологический раствор. Отмывание эритроцитов производят трижды. После окончания приготовления стандартных эритроцитов к ним добавляют консервант и хранят в холодильнике при температуре от +6° до +8 °С в течение 2 месяцев, титр их не должен быть ниже 1:32.

Методика определения групп крови по стандартным эритроцитам:

-На белую планшетку со смачиваемой поверхностью наносятся цифровые изображения групп крови и серологическая формула стандартных эритроцитов рядом с каждой из трех клеток.

— В каждую клетку соответственно подписям слева направо наносятся испытуемая плазма реципиента в количестве 2 капель (0,1 мл)

— Рядом добавляется маленькая капля (0,01 мл) стандартных эритроцитов в соотношении 1 к 10.

— Капли тщательно перемешивают палочками (каждую каплю — отдельной палочкой, углом предметного стекла)и дается экспозиция в течение 3—5 минут

2. Положительная реакция агглютинации (+)со со стандартными эритроцитами группы B(III) Следовательно, исследуемая сыворотка (плазма ) содержит агглютинин «b»и кровь принадлежит к группе A(II)

3.Положительная реакция агглютинации (+)со стандартными эритроцитами групп A(II) .Следовательно, исследуемая сыворотка (плазма ) содержит агглютинины «a» и кровь принадлежит к группе B(III).

Ошибки при определении группы крови:

Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

Наверх